Chambre de comptage MUHWA pour les sédiments urinaires

I. Sélection de la grille
Le comptage des sédiments urinaires utilise généralement quatre grandes grilles d'angle ou une grande grille centrale (ajustées en fonction du nombre de cellules/moulages : quatre grilles d'angle pour un grand nombre de cellules, une grande grille centrale pour un petit nombre de cellules).

Préparation des échantillons et traitement préalable au comptage
Collection de spécimens :
On recueille généralement 10 mL d'urine fraîche du matin (concentration élevée, taux de positivité élevé) ou de l'urine prélevée au hasard, dans un tube à centrifuger.

Concentration par centrifugation : Centrifuger à 1 500 tr/min pendant 5 minutes conformément aux procédures opératoires standard.

Éliminer le surnageant : Éliminer soigneusement le surnageant en conservant les 0,2 mL inférieurs de sédiment (concentration 50 fois, facteur de concentration = volume d'urine initial / volume de sédiment = 10/0,2 = 50).

Remettre le sédiment en suspension : agiter doucement le tube à centrifuger pour disperser uniformément le sédiment et éviter l’agrégation cellulaire.

Procédure de comptage : Ajout d’échantillon : Utilisez une micropipette pour prélever le sédiment urinaire mélangé et ajoutez-le au bord de la lamelle couvre-objet sur la chambre de comptage (en utilisant l’action capillaire pour remplir la chambre de comptage), en évitant les bulles d’air (les bulles d’air entraîneront un volume inexact dans la zone de comptage).

Sédimentation : Placez la chambre de comptage sur la platine et laissez-la reposer pendant 1 à 2 minutes pour permettre aux éléments formés de se déposer au fond de la chambre de comptage, évitant ainsi les erreurs causées par les cellules flottantes pendant le comptage.

Observation microscopique : Utilisez un microscope à faible grossissement (10×) pour localiser la chambre de comptage, puis utilisez un microscope à fort grossissement (40×) pour le comptage.

Principes de comptage : Suivez le principe « compter le haut mais pas le bas, compter la gauche mais pas la droite » (ne comptez que les cellules adjacentes et celles situées aux coins des lignes) afin d’éviter les doublons et les omissions. Sélection de la zone de comptage : Pour les composants contenant un grand nombre de globules rouges, de globules blancs, etc. : comptez tous les composants cibles dans les quatre carrés situés aux coins.

Pour les composants comportant un petit nombre de moulages, etc. : Comptez tous les composants cibles dans les neuf grands carrés de la chambre de comptage.

Méthode de calcul principale : comptage des sédiments urinaires

Le calcul convertit la « quantité réelle dans la zone de comptage » en « concentration initiale des composants dans l'urine ». La formule nécessite la prise en compte du volume de la zone de comptage et du facteur de concentration de l'échantillon.

Formule générale de calcul :

Exemple de calcul spécifique (comptage des 4 cellules d'angle à titre d'exemple) :


1. Déterminer les paramètres :

Zone de comptage : 4 grandes cellules, volume de chaque grande cellule = 0,1 μL, donc le volume total de 4 grandes cellules = 4 × 0,1 = 0,4 μL.

Facteur de concentration : Après centrifugation de 10 mL d'urine, 0,2 mL de sédiment sont retenus, facteur de concentration = 10/0,2 = 50.

Nombre réel : Supposons qu'un total de 80 globules blancs soient comptés dans les 4 cellules situées aux coins.


Cas de comptage de cellules plus petites (comptage de 9 grandes cellules)

Si l'on compte 9 grandes cellules (par exemple, comptage de cylindres), alors « volume total de la zone de comptage = 9 × 0,1 = 0,9 μL », les autres paramètres restent inchangés et la formule peut être appliquée.

Neuf zones de comptage (chacune avec un volume de liquide de 0,1 μL), chaque zone mesurant 3 mm x 3 mm, avec une profondeur de 100 μm. La largeur de la ligne de la grille est de 15 μm (±1 μm).